Kyuubei Yagyuu ist der alleinige Erbe der angesehenen Yagyuu-Familie, eines Clans, der seit Generationen dem Shogunat dient und eine berühmte Schwertkunstschule betreibt. Als Frau geboren, wurde sie von ihrem Vater und Großvater nach dem Tod ihrer Mutter bei der Geburt als Mann erzogen, da die Familienlinie einen männlichen Nachfolger erforderte. Diese Erziehung prägte ihre Identität: Sie präsentiert sich als gutaussehender, androgyner junger Samurai, trägt eine Augenklappe über ihrem linken Auge und spricht mit einem männlichen Personalpronomen. Ihr Name bezieht sich auf den historischen Samurai Yagyu Jubei Mitsuyoshi, wobei das Kanji für kyu neun bedeutet.

Was die Persönlichkeit betrifft, wirkt Kyuubei zunächst kalt, ernst und distanziert – ein Verhalten, das durch intensives Training und den strengen Kodex des Yagyuu-Clans geformt wurde. Sie ist ein genialer Schwertkämpfer, der als das größte Talent der Familiengeschichte gepriesen wird und in der Lage ist, es mit erfahrenen Kämpfern wie Hijikata Toushirou und Sakata Gintoki aufzunehmen oder sie zu überwältigen. Doch unter dieser stoischen Fassade verbirgt sich eine weichere, verletzlichere Seite, die durch ihre tiefe Verbundenheit zu Shimura Tae, ihrer Kindheitsfreundin, zum Vorschein kommt. Kyuubei hegt seit ihrer Jugend romantische Gefühle für Tae, und diese Gefühle motivieren viele ihrer Handlungen. Während ihres ersten großen Handlungsbogens, des Yagyuu-Arcs, versuchte sie, eine Verlobung mit Tae zu erzwingen, aber nachdem sie gestoppt wurde, entwickelte sich eine freundschaftliche, beschützende Beziehung. Sie ist Tae äußerst ergeben, folgt ihr überallhin und beschützt sie leidenschaftlich, sogar indem sie unerwünschte Aufmerksamkeit von Figuren wie Kondou Isao abwehrt.

Kyuubeis Erziehung hinterlässt auch ein verwirrendes Gefühl der Geschlechtsidentität. Manchmal sehnt sie sich danach, mehr wie ein normales Mädchen zu leben, doch gleichzeitig fühlt sie sich mit der ihr auferlegten männlichen Rolle wohl. Im Laufe der Serie lernt sie, mit dieser Ambivalenz umzugehen, und entscheidet sich schließlich, einfach als Yagyuu Kyuubei zu leben, ohne sich strikt an Weiblichkeit oder Männlichkeit zu halten. Dieser innere Konflikt wird sowohl ernst als auch komisch dargestellt, da sie oft Dinge wörtlich nimmt, mit übertriebener Gereiztheit reagiert, wenn ihr Leibwächter Toujou Ayumu vorschlägt, Gothic-Lolita-Kleider zu tragen, und einen automatischen Reflex zeigt, jeden Mann anzugreifen, der sie berührt. Trotz ihrer beeindruckenden Fähigkeiten hat sie eine alberne, zerstreute Seite, die sie zu einer wiederkehrenden Quelle der Komik macht, besonders wenn sie Kaguras willkürliche Bemerkungen für bare Münze nimmt oder mit Katsura Kotarou um Bildschirmzeit konkurriert.

Ihre Rolle in Gintama: The Final Movie ist die einer Nebenfigur, die sich der groß angelegten Schlacht gegen den endgültigen Antagonisten Utsuro und die Streitkräfte der Tendoushuu anschließt. Gemeinsam mit der Shinsengumi, den Bewohnern von Kabukicho und anderen Verbündeten kämpft sie, um Edo zu beschützen. Der Film gibt ihr keinen eigenen Nebenhandlungsstrang, aber sie tritt als Teil der versammelten Besatzung auf, die das Terminal verteidigt, und nutzt ihre außergewöhnliche Kampffähigkeit, um zur Schlacht beizutragen. Ihre wichtigsten Beziehungen beeinflussen weiterhin ihre Handlungen: Ihre Bindung zu Tae bleibt stark, und sie pflegt eine respektvolle Rivalität mit Schwertkämpfern wie Gintoki und Hijikata. Ihr Leibwächter Ayumu ist immer noch übermäßig beschützend, eine Dynamik, die selbst in den ernsteren Momenten des Films für gelegentliche komische Erleichterung sorgt.

In Bezug auf die Entwicklung hat sich Kyuubei von einem stolzen, konfrontativen Antagonisten zu einem loyalen Freund und zuverlässigen Verbündeten entwickelt. Sie kämpft immer noch mit ihrer Geschlechtsidentität, aber sie ist selbstbewusster geworden und offener für emotionale Verbindungen, insbesondere durch ihre Freundschaft mit Tae. Im Final Movie durchläuft sie kein bedeutendes neues Wachstum, aber ihre Anwesenheit verstärkt das Thema der Einheit unter den vielfältigen Charakteren, die zusammenkommen, um der ultimativen Bedrohung entgegenzutreten.

Zu den bemerkenswerten Fähigkeiten gehört ihre außergewöhnliche Schwertkunst, die durch Schnelligkeit, Präzision und strategisches Denken gekennzeichnet ist. Sie ist in der Lage, sich gegen einige der stärksten Kämpfer der Serie zu behaupten. Sie hat auch einen einzigartigen Reflex, der sie instinktiv zuschlagen lässt, wenn sie von Männern berührt wird – eine Eigenart, die sie manchmal bewusst unterdrückt, wenn nötig. Ihre Entschlossenheit, diejenigen zu beschützen, die ihr am Herzen liegen, insbesondere Tae, ist eine treibende Kraft hinter ihren Handlungen, und sie erweist sich als bereit, an der Seite jedes Verbündeten zu kämpfen, unabhängig von vergangenen Konflikten.