Kyūbee Yagyū ist der alleinige Erbe und nächste Oberhaupt der angesehenen Familie Yagyū, einer Linie, die seit Generationen dem Shogun dient. Obwohl biologisch weiblich, wurde sie als Junge aufgezogen und von frühester Kindheit an als Samurai ausgebildet. Ihre Mutter starb kurz nach ihrer Geburt, und ihr Vater Koshinori entschied sich, nicht wieder zu heiraten, sondern Kyūbee als Jungen zu erziehen, um den Fortbestand der Familienlinie zu sichern. Auch ihr Großvater Binbokusai war an dieser Erziehung beteiligt. Dieser ungewöhnliche Hintergrund prägte jeden Aspekt ihrer Identität und Persönlichkeit.

Als kleines Kind war Kyūbee ein schwaches und ängstliches Heulsuse, das oft von ihrer Kindheitsfreundin Shimura Tae beschützt wurde. Eines Tages, als Schuldeneintreiber kamen, um Tae und ihren Bruder Shinpachi zu verletzen, griff Kyūbee ein und verlor dabei ihr linkes Auge. Von diesem Moment an war sie fest entschlossen, stark genug zu werden, um Tae zu beschützen, und stürzte sich in ein rigoroses Training der Yagyū-Schwertkunst. Das Auge ist dauerhaft von einer Augenklappe bedeckt, die zu einem charakteristischen Teil ihres Erscheinungsbildes geworden ist. Sie trägt normalerweise einen Pferdeschwanz und formelle Samurai-Kleidung.

Kyūbee besitzt eine auffallend kalte und stoische Haltung, wahrscheinlich eine Folge ihrer intensiven Disziplin und des Drucks, die Familiennachfolgerin zu sein. Diese Fassade verbirgt jedoch eine komplexere und allmählich weichere Persönlichkeit. Sie ist Tae zutiefst ergeben, mit romantischen Gefühlen, die über einfache Freundschaft hinausgehen. Während ihres ersten Auftritts im Yagyū-Arc versuchte sie, Tae gewaltsam zu ihrer Verlobten zu machen, was zu Konflikten mit der Yorozuya und der Shinsengumi führte. Nach diesem Konflikt fand sie sich in einer freundschaftlicheren Beziehung mit Tae wieder, obwohl ihre Liebe stark bleibt und sie sie heftig beschützt. Sie hat eine reflexive, fast gewalttätige Reaktion auf Berührungen durch Männer und wirft sie oft ohne nachzudenken über ihre Schulter.

Trotz ihrer ernsten Fassade hat Kyūbee eine ausgeprägte naive und wörtliche Seite, die sie zu einer natürlichen Quelle für todernste Komik macht. Sie neigt dazu, absurde Aussagen für bare Münze zu nehmen und wird von alltäglichen sozialen Situationen verwirrt. Diese Aufrichtigkeit, kombiniert mit ihrem unerschütterlichen Pflichtbewusstsein, führt sie in viele lächerliche Situationen. Im Laufe der Zeit ist sie zu einer regelmäßigen Nebenfigur geworden, die sowohl in ernsten Kampf-Arcs als auch in rein komödiantischen Episoden auftritt. Sie kämpft auch mit Fragen der Geschlechtsidentität – als Junge erzogen, aber von Geburt weiblich – und entscheidet sich später in der Geschichte bewusst dafür, einfach als Yagyū Kyūbee zu leben, ohne sich strikt an Männlichkeit oder Weiblichkeit zu halten. Manchmal trägt sie feminine Kleidung und genießt es, ein Mädchen zu sein, aber sie behält auch ihren Stolz als Schwertkämpferin.

Ihre bemerkenswerteste Fähigkeit ist ihre außergewöhnliche Schwertkunst. Als das größte Genie in der Geschichte der Familie Yagyū bezeichnet, kann sie es mit erfahrenen Kämpfern wie Tōshirō Hijikata und Sakata Gintoki aufnehmen oder sie übertreffen. Ihr Stil betont blendende Geschwindigkeit und Präzision, was sie zu einer beeindruckenden Gegnerin im Nahkampf macht. Sie zeigt auch etwas Geschäftssinn, indem sie mit Tae ein kleines Bauunternehmen gründet.

Wichtige Beziehungen prägen ihren Weg. Tae ist ihre primäre Liebesinteresse und die Person, die sie über alles beschützen möchte. Shinpachi, Taes Bruder, ist ein Verbündeter, obwohl er während des Verlobungsversuchs zunächst feindselig war. Gintoki gewann ihren Respekt, nachdem er sie besiegte und ihr half, ihr Leben zu überdenken; später werden sie freundschaftliche Rivalen. Hijikata ist ein weiterer Rivale, mit dem sie auf Augenhöhe kämpfen kann. Kondō Isao, der ebenfalls um Tae wirbt, ist sowohl Rivale als auch Leidensgenosse von Taes Kochkünsten, was zu seltsamen Momenten der Kameradschaft führt. Ihr überfürsorglicher Gefolgsmann Tōjō Ayumu ist eine ständige Quelle der Irritation, da er oft versucht, sie in Gothic-Lolita-Kleidung zu stecken, aber sie erkennt sein Können an. Katsura Kotarō behandelt sie gelegentlich als Rivalin um Bildschirmzeit und beschuldigt sie, seinen Charakter-Trope des ernsten, langhaarigen Luftikus zu stehlen.

Im Laufe der Serie entwickelt sich Kyūbee von einer arroganten, gewalttätigen Antagonistin zu einer loyalen Freundin und einem zuverlässigen, wenn auch exzentrischen Mitglied der Besetzung. Ihre Geschichte berührt Themen wie Identität, Pflicht und den Mut, man selbst zu sein, während sie den respektlosen Humor bewahrt, der Gintama ausmacht. Sie bleibt eine der bekanntesten und beliebtesten Nebenfiguren der Serie.