Als Kind nach Yoshiwara verkauft, wurde Tsukuyo unter der Kurtisane Kamekichi ausgebildet und entwickelte tiefen Hass auf das Viertel, bis Hinowas Einfluss ihren Sinn darin bestärkte, sowohl Hinowa als auch Yoshiwara zu beschützen. Dieser Entschluss führte sie zum Attentäter Jiraia, um Ninja-Training zu erhalten, wobei sie sich ihr Gesicht als Symbol der Hingabe zur Ablehnung der Weiblichkeit vernarbte. Jiraia opferte sich Jahre zuvor in einem Feuer für sie, tauchte später jedoch wieder auf und enthüllte seine Manipulation: Er suchte den Tod als Selbstbestrafung für das Versagen gegenüber seiner Schwester. Tsukuyo tötete ihn schließlich, erfüllte seinen Wunsch und trug ihn, um den Mond zu erblicken.
Als Anführerin von Yoshiwaras rein weiblicher Ordnungstruppe, der Hyakka, sorgte sie unter Housen für Ordnung, während sie heimlich Hinowas Anweisungen folgte. Sie lief über, um sich mit den Yorozuya zu verbünden und Hinowa mit ihrem Sohn Seita zu vereinen. Anfangs kalt und reserviert, öffnete sie sich emotional allmählich durch die Interaktionen mit den Yorozuya. Obwohl sie beauftragt war, gesetzesbrechende Prostituierte zu töten, inszenierte sie stattdessen ihren Tod und versteckte sie innerhalb der Hyakka.
Tsukuyo trägt blondes Haar, das mit Miniatur-Kunais zusammengebunden ist, und Narben, die ihre linke Stirn und Wange durchziehen. Typischerweise trägt sie einen schwarzen Kimono mit Herbstblatt-Motiven, dem der rechte Ärmel fehlt, um ihr rechtes Bein, Netzstrümpfe und knielange Stiefel zu zeigen. Ein abgetrennter Ärmel bedeckt ihren rechten Arm, und sie führt oft eine Kiseru-Pfeife mit sich. Während des Dekoboko-Arcs verwandelte sie ein Fluch vorübergehend in eine männliche Form mit kürzerem Haar und einem über die Schultern gelegten Kimono.
Ihre Persönlichkeit vereint Stoizismus mit tiefer Güte. Sie reagiert rücksichtslos auf Bedrohungen gegen Hinowa oder Seita und wirft häufig Kunais auf Sakata Gintoki bei Provokationen. Obwohl sie behauptet, die „Frau in sich getötet“ zu haben, gibt sie zu, dass Gintoki diesen Entschluss untergräbt, was auf unerkannte romantische Gefühle hindeutet. Alkohol löst aggressive, sadistische Ausbrüche aus – selbst minimale Mengen zielen auf Gintoki –, doch sie leidet nie unter Kater. Sie verwendet männliche Pronomen wie „wacchi“ und zeigt hohe Intelligenz, indem sie Seita in japanischer Geschichte unterrichtet.
Ausgebildet im Iga-Stil-Ninjutsu, spezialisiert sie sich auf perfekte Kunai-Wurfgenauigkeit und -Geschwindigkeit, kann Projektilen ausweichen und glänzt im Nahkampf mit Tantos oder Vitalpunkt-Angriffen. Ihre Reflexe übertreffen Gegner wie Abuto, unterstützt von übermenschlicher Kraft und Ausdauer. Mit dem Spitznamen „Tsukki“ von Kagura und Sarutobi Ayame verbunden, wird sie mythologisch mit Tsukuyomi, dem Mondgott, assoziiert, im Gegensatz zu Hinowas Sonnenbezug.
Zu ihren Schlüsselbeziehungen zählen eine mütterliche Bindung zu Hinowa, die sie als ältere Schwester betrachtet; beschützende Hingabe zu Seita, den sie wie einen Sohn behandelt; Rivalität mit Sarutobi Ayame um Gintokis Zuneigung; und eine komplexe Dynamik mit Gintoki, insbesondere als sie im Courtesan of a Nation Arc ihr Leben riskierte, um ihn zu retten. In Umfragen belegt sie konstant den zweiten Platz der beliebtesten weiblichen Charaktere der Serie.