Usagi Tsukino, in einigen englischen Manga-Versionen als Bunny bekannt, beginnt als gewöhnliche Mittelschülerin im Tokioter Stadtteil Azabu-Jūban. Ihr Leben ändert sich unwiderruflich, als Luna, eine sprechende schwarze Katze, ihr Schicksal als Sailor Moon enthüllt, die wiedergeborene Prinzessin Serenity des alten Mondkönigreichs. Dieses Erbe bindet sie an den mächtigen Silberkristall und definiert ihre Rolle als Hüterin der Liebe und Gerechtigkeit.
Ihre zivile Identität zeigt ein unbekümmertes, tollpatschiges Teenagermädchen mit schlechten Lerngewohnheiten und der Neigung, leicht zu weinen. Sie lebt mit ihren Eltern, Kenji und Ikuko Tsukino, und ihrem jüngeren Bruder Shingo. Frühe Darstellungen betonen Unreife und Widerwillen gegenüber ihren Pflichten, die durch angeborene Güte und Mitgefühl ausgeglichen werden. Als Sailor Moon ist sie anfangs auf Verbündete wie Tuxedo Mask (Mamoru Chiba) angewiesen, der später als ihr Geliebter aus einem früheren Leben, Prinz Endymion, enthüllt wird. Ihre Beziehung entwickelt sich von Antagonismus zu einer tiefen Romanze und verkörpert das Thema der schicksalhaften Liebe über mehrere Leben hinweg.
Ihre Charakterentwicklung umfasst mehrere Bögen, in denen sie sich von einer selbsternannten „Heulsuse“ zu einer entschlossenen Anführerin entwickelt, die ihre Pflichten annimmt, ohne ihren grundlegenden Optimismus zu verlieren. Ein zentraler Wachstumsschritt ist die Versöhnung ihrer menschlichen Identität mit ihrer Vergangenheit als Prinzessin Serenity und ihrer Zukunft als Neo-Queen Serenity, Herrscherin der Erde im 30. Jahrhundert. Dazu gehört auch, ihre Rolle als Mutter von Chibiusa (Sailor Chibi Moon) zu akzeptieren, die aus der Zukunft reist, um mit ihr zu trainieren.
Ihre Kräfte und Verwandlungen entwickeln sich erheblich: Grundfähigkeiten umfassen eine Tiara-Waffe und Angriffe wie „Moon Tiara Action“, die später durch den Crystal Star und den Cosmic Heart Compact erweitert werden. Als Super Sailor Moon erhält sie einen mehrfarbigen Rock, verbesserte Heilfähigkeiten und die „Moon Spiral Heart Attack“. Ihre Eternal Sailor Moon-Form zeigt Engelsflügel, einen dreischichtigen Rock und die volle wirklichkeitsverändernde Kraft des Silberkristalls. Ihre Fähigkeiten priorisieren Reinigung und Heilung statt Zerstörung, was ihren Glauben an Erlösung widerspiegelt.
Zu ihren Persönlichkeitsmerkmalen zählt unerschütterliches Mitgefühl, das oft zu Selbstaufopferung führt, um andere zu schützen. Sie sucht konsequent nach gewaltfreien Lösungen, selbst für manipulierte Zivilisten oder Antagonisten. Völlerei (besonders für Süßigkeiten) und romantische Tagträume sorgen für Leichtigkeit, während ihre Loyalität zu Freunden und Familie grundlegend bleibt. Ihre Führungsqualitäten zeigen sich in der Einigung der Sailor Guardians, einschließlich Verbündeter aus äußeren Systemen wie Sailor Uranus und Neptune.
In Spin-offs wie Codename: Sailor V (mit Sailor Venus) hat sie kurze Auftritte, die ihren Status als zentrale Figur der Guardian-Mythologie bestätigen. Filme und OVAs, wie der Kurzfilm Make Up! Sailor Guardians, bekräftigen ihre Kernidentität, ohne neue Hintergrundgeschichten einzuführen.