Dio Brando, später nur noch als DIO bekannt, entstammte als Sohn des gewalttätigen Alkoholikers Dario Brando im London der 1860er Jahre. Nach der heimlichen Vergiftung seines Vaters nutzte Dio George Joestars Schuldgefühle, um sich in die Joestar-Familie adoptieren zu lassen. Systematisch quälte er seinen Adoptivbruder Jonathan Joestar durch psychische und physische Misshandlungen, gipfelnd in der Verbrennung von Jonathans Hund Danny und dem erzwungenen Kuss mit Jonathans Freundin Erina Pendleton.
Dios Ambitionen eskalierte, als er George Joestar vergiftete, um das Familienvermögen an sich zu reißen. Von Jonathan entlarvt, aktivierte Dio eine uralte Steinmaske, die ihn bei Blutkontakt in einen Vampir verwandelte. Als Vampir verfügte er über übermenschliche Kraft, Regeneration, Eisfähigkeiten ("Vaporizing Freezing Technique") und Projektil-Angriffe aus den Augen ("Space Ripper Stingy Eyes"). Er erschuf Zombie-Minions und hybride Chimären, terrorisierte Windknight's Lot und strebte nach Weltherrschaft.
Nach langem Konflikt schien Jonathan Joestar Dio während einer Schiffs-explosion zu töten. Dio überlebte, indem er seinen abgetrennten Kopf auf Jonathans Leiche pflanzte und für ein Jahrhundert am Meeresgrund verharrte. 1983 als DIO wiederauferstanden, errichtete er in Kairo eine Basis und erwarb via Enya Geil einen Stand – The World. Dieser konnte die Zeit für bis zu neun Sekunden anhalten, eine Kraft, die DIO zunächst zufällig in Defensivtests offenbarte. Durch Jonathans Körper manifestierte er zudem einen zweiten Stand ähnlich Hermit Purple, der Präkognition gewährte.
DIOs Rückkehr erweckte Stand-Fähigkeiten in Jonathans Nachkommen, darunter Jotaro Kujo und Holly Joestar. Um die Joestar-Blutlinie auszulöschen und "den Himmel" zu erreichen, entsandte DIO zahlreiche Stand-Nutzer als Attentäter. Sein Endkampf gegen Jotaro endete am 16. Januar 1989 mit seinem Tod, als Jotaro seinen Schädel zerschmetterte und seinen Körper dem Sonnenlicht aussetzte.
Posthum lebte DIOs Vermächtnis fort. Er zeugte mindestens vier illegitime Kinder – Giorno Giovanna, Donatello Versus, Ungalo und Rikiel – indem er Frauen verschonte, die er als moralisch verdorben erachtete, um Erben mit seinem Willen zu schaffen. Sein größter Einfluss zeigte sich durch Enrico Pucci, einen Priester, den er in den 1980ern mentorierte. DIO offenbarte Pucci seinen Wunsch nach "dem Himmel", einem Plan zur Manipulation der Gravitation und Neustart des Universums für absolute Kontrolle. Er übergab Pucci sein Knochenfragment und Tagebücher, wodurch die Ereignisse von Stone Ocean in Gang gesetzt wurden.
Physisch besaß DIO einen muskulösen Körperbau, blonde Haare und Kleidung mit Herz-Motiven. Nach der Fusion mit Jonathans Körper verbarg er zunächst sein Gesicht im Schatten, bevor er extravagante Outfits mit freiliegendem Mittelteil und Knieschonern trug. Nach der Blutaufnahme von Joseph Joestar wirkte sein Erscheinungsbild verstörter, mit stacheligeren Haaren und dunkleren Lippen.
Persönlichkeitsmäßig vereinte DIO Größenwahn mit strategischem Charisma. Kindheitsmisshandlungen formten seine Philosophie, die Menschlichkeit und Moral ablehnte und Herrschaft durch Manipulation oder Gewalt propagierte. Echten Respekt bewahrte er einzig für Jonathan Joestars Widerstandskraft, dessen Körper er als würdiges Gefäß betrachtete. Trotz Allianzen wie mit Pucci dienten seine Beziehungen stets seinen Ambitionen; er befahl Enya Geils Tod, sobald sie nutzlos wurde.