Penelope ist ein dreijähriger blauer Koala mit einer roten Nase, einem neugierigen und lebhaften Wesen und einer Tendenz zur Zerstreutheit. Sie lebt in einer fröhlichen, bunten Welt mit ihrer Familie, zu der ihre Mutter, ihr Vater und ein weicher blauer Hase namens Dou Dou gehören, ihr ständiger Begleiter und Lieblingskuscheltier. Die Serie begleitet ihre täglichen Abenteuer, während sie die kleinen, aber bedeutsamen Meilensteine der frühen Kindheit bewältigt – vom selbstständigen Anziehen und Fahrradfahrenlernen bis hin zum Picknick und Plätzchenbacken mit Freunden. Jede fünfminütige Folge zeigt einen kleinen Ausschnitt ihres Lebens und konzentriert sich auf die unschuldigen Fehler und Entdeckungen, die mit dem sehr jungen Alter einhergehen, wie etwa Süßigkeiten statt Samen in einen Blumentopf zu pflanzen, beim Aufräumen ihres Zimmers eine Socke zu verlieren oder versehentlich den Stöpsel zu ziehen, während sie Dou Dou in einem blubbernden Bad sucht. Zu ihrem Freundeskreis gehören Lily Rose, Cezarine, Aladin und Strombouli, und gemeinsam besuchen sie den Kindergarten, spielen Verstecken und erkunden die Welt um sie herum unter der sanften Anleitung geduldiger Erwachsener wie ihrer Großeltern und Lehrerin. Der Erzählstil ist sanft und beobachtend, wobei ein Erzähler oft dabei hilft, Penelopes Gedankengänge zu strukturieren, während sie alltägliche Herausforderungen meistert wie das Grüßen und Verabschieden, das Lernen von Farben und Formen oder das Verstehen, warum sie nicht die ganze Nacht zum Spielen aufbleiben darf. Während die meisten Folgen die einfachen, nachvollziehbaren Freuden und kleinen Missgeschicke des Vorschullebens behandeln, umfassen bemerkenswerte Handlungsbögen Penelopes Vorbereitungen auf große Feiertage wie Weihnachten und Karneval, die Feier des Geburtstags ihres Großvaters und in späteren Staffeln die Anpassung an die Ankunft jüngerer Geschwister, als sie große Schwester von Zwillingen namens Eustache und Philomène wird. Die Serie bewahrt eine weiche, märchenbuchhafte Ästhetik, die die originalen Bilderbücher treu adaptiert, und betont Wärme, Neugier und die sanfte Bestätigung, dass Fehler ein natürlicher und sogar wunderbarer Teil des Heranwachsens sind.