Assassine von Rot ist der Diener von Shirou Kotomine im Großen Heiligen Gral-Krieg. Ihr wahrer Name ist Semiramis, die legendäre Königin von Assyrien und die älteste Giftmischerin der Menschheitsgeschichte. Ihre Legende besagt, dass sie von einem menschlichen Mann und der syrischen Meeresjungfrau-Göttin Derketo geboren und dann von ihrer Mutter am Wasserrand ausgesetzt wurde. Sie wurde von den Flügeln von Tauben warm gehalten und mit deren Milch gefüttert, bis ein Hirte sie fand und aufzog. Nachdem sie einen alten General namens Onnes geheiratet hatte, wurde sie vom syrischen König Ninus genommen, der sich in ihre Schönheit verliebte. Dies führte zum Selbstmord ihres Mannes. Semiramis gewann dann die Gunst des Königs mit genialen Schlachtplänen, heiratete ihn und vergiftete ihn nur wenige Tage später, um Rache für ihren verstorbenen Mann zu nehmen. Sie regierte danach jahrzehntelang als Regentin über Assyrien.

Beschrieben als eine beispiellose Schönheit mit einer verdorbenen oder dekadenten Atmosphäre, trägt sie ein Kleid, so dunkel wie Mitternacht, und verströmt einen angenehmen Duft. Ihr Erscheinungsbild ist auffällig, mit langem schwarzem Haar, goldenen Augen und spitzen Ohren, und sie ist bekannt für die Stacheln, die aus jeder ihrer Hände ragen. Als Person gibt sich Semiramis Luxus und Extravaganz hin, doch sie hasst Schlichtheit nicht. Sie ist leidenschaftlich, stolz und hochmütig und glaubt, dass ein Herrscher anderen überlegen sein und größere Begierden haben muss. Für sie sind Könige natürlicherweise Tyrannen, und sie sieht Genügsamkeit bei denen mit Autorität als bloßes Spiel an.

Unter dieser arroganten Fassade verbirgt sich eine tiefsitzende Ablehnung anderer. Sie genießt die Einsamkeit nicht, zieht es aber vor, distanziert zu sein, und verlangt, dass alle Menschen ihr bedingungslos dienen. Diese Denkweise ist der Grund, warum viele ihrer verbündeten Diener sie instinktiv nicht mögen. Da sie als Säugling ausgesetzt wurde, verachtet sie ihre Mutter dafür, dass sie sich in einen Mann verliebte und ihre Pflichten vernachlässigte, obwohl sie dankbar ist, dass das göttliche Blut ihrer Mutter in ihren Adern fließt. Sie betrachtet schwache Frauen, die von Männern manipuliert werden, als verabscheuungswürdig und sieht Männer, die gedankenlos Anspruch auf Frauen erheben, im gleichen Licht.

Semiramis wird von Shirou Kotomine beschworen und tief in seinen Plan für die Erlösung der Menschheit verwickelt. Anfangs verwirrt von seiner Behauptung, dass er weder Sieg noch Niederlage, sondern ein anderes Ziel anstrebt, erwägt sie, einen neuen Meister zu finden. Doch sie beginnt, ihn zu respektieren, und übernimmt schließlich seinen Wunsch als ihren eigenen. Shirou ist einzigartig, weil er sie für ihre Fähigkeiten und nicht für ihre Schönheit schätzt, was das erste Mal ist, dass sie so etwas erlebt. Dies verwirrt ihre Gefühle, schafft zunächst ein Gefühl der Zuneigung, dann seltsame Wut und schließlich einen Herzschmerz, den sie nicht benennen kann. Sie fühlt sich zu einem Mann hingezogen, der vorwärts geht, ohne auf sie zurückzublicken.

Ihre Hauptrolle in der Geschichte ist die als eine der Drahtzieherinnen der Roten Fraktion. Zusammen mit Shirou übernimmt sie die Kontrolle über die anderen Roten Meister, indem sie ihre Tauben nutzt, um Nachrichten zu überbringen, und ihre Gifte, um sie zu manipulieren. Sie ist maßgeblich am Bau ihres größten Edlen Phantasmas, der Hängenden Gärten von Babylon, beteiligt, die als mobile fliegende Festung der Fraktion dienen. Während des Krieges überwacht sie die Schlachten von ihrem Thronsaal in den Gärten aus, nutzt deren magische Verteidigungsanlagen, um Feinde anzugreifen und den Kampfverlauf zu lenken. Sie zeigt besondere Feindseligkeit gegenüber Saber von Rot, Mordred, die Semiramis wegen ihrer manipulativen Art mit ihrer eigenen Mutter Morgan vergleicht. Sie findet auch Caster von Rot, Shakespeare, aufgrund seiner unberechenbaren Handlungen lästig.

Semiramis durchläuft keine dramatische Persönlichkeitsveränderung, aber ihre Beziehung zu Shirou Kotomine offenbart eine verborgene Tiefe. Was in ihrem Kern liegt, ist eine absolute Ablehnung anderer, doch Shirou zerbricht dies einfach dadurch, dass er sich nicht um sie kümmert, wie andere es tun. Sie beginnt als berechnende Tyrannin, die nur danach strebt, die Welt zu beherrschen, aber am Ende wird unklar, ob dies jemals ihr wahrer Wunsch war. In ihren letzten Momenten bleibt das, was sie wirklich suchte, etwas, das sie nicht verstehen kann, vielleicht etwas so Reines wie sauberes Wasser.

Ihre Fähigkeiten sind außergewöhnlich aufgrund eines seltenen Merkmals namens Doppelbeschwörung, das ihr die Klassenfähigkeiten sowohl von Assassine als auch von Caster verleiht. Ihre Anwesenheitsverbergung erlaubt es ihr, sich unentdeckt zu bewegen, was sie mit ihrer Meisterschaft in Giften zu tödlicher Wirkung kombiniert. Sie besitzt die Fähigkeit Gegenstandskonstruktion, aber sie kann nur Gifte erschaffen, anstatt eine Vielzahl von Werkzeugen. Ihre Gebietserschaffung ist direkt mit ihrem Edlen Phantasma verbunden. Sie kommandiert auch graue Tauben als Vertraute, die sie für Aufklärung und die Überbringung von Nachrichten über große Entfernungen einsetzt. Ihre zwei Edlen Phantasmata definieren ihre Kampffähigkeiten. Die Hängenden Gärten von Babylon sind eine EX-klassifizierte Anti-Welt-Festung, die in der Luft schwebt und Tage der Rituale sowie enorme materielle Ressourcen für ihren Bau erfordert. Während sie sich darin befindet, werden ihre Parameter erhöht, und sie erhält Zugang zu mächtigen magischen Angriffen und Verteidigungsanlagen. Ihr zweites Edles Phantasma, Sikera Ušum oder Arroganter König Alkohol, erlaubt es ihr, die Umgebung, einschließlich der Luft und der magischen Energie selbst, zu vergiften. Sie kann phantastische Arten, die mit Gift verbunden sind, beschwören und die Art des von ihr eingesetzten Giftes verändern.