Luke Valentine ist ein künstlicher Vampir und Mitglied der Millennium-Organisation, wo er den SS-Dienstgrad eines Oberscharführers innehat. Er ist der ältere Bruder von Jan Valentine, und die beiden werden oft als die Valentine-Brüder bezeichnet. Luke zeichnet sich durch ein ruhiges, gefasstes und kultiviertes Auftreten aus, das in starkem Kontrast zur vulgären und aufbrausenden Art seines jüngeren Bruders steht. Er präsentiert sich als gut gekleideter, leise sprechender Mensch, aber unter dieser gepflegten Oberfläche verbirgt sich ein rücksichtsloser und äußerst fähiger Kämpfer.

Sein Hintergrund vor seiner Verwandlung zum Vampir wird nicht im Detail untersucht, aber es ist bekannt, dass er als Millennium-Agent agiert und großen Stolz auf seine Fähigkeiten legt. Lukes Hauptmotivation ist es, seine eigene Stärke gegen den furchterregendsten Gegner zu testen, den er finden kann: Alucard, den Vampirdiener der Hellsing-Organisation. Er sieht sich selbst als mehr als nur ein wegwerfbares Werkzeug und versucht zu beweisen, dass er ein würdiger Gegner ist, nicht nur ein Zahnrad in Milleniums Kriegsmaschinerie.

Luke spielt eine Schlüsselrolle in der Geschichte als einer der ersten großen Antagonisten, denen Alucard in Hellsing Ultimate gegenübersteht. Er führt einen Trupp Ghule bei einem Präventivschlag auf das Hellsing-Anwesen während eines Treffens der Ritter der Tafelrunde an. Seine zugewiesene Mission ist es, Alucard zu töten. Er stellt sich dem Vampir in dessen Kellerversteck und verlässt sich zunächst auf seine außergewöhnliche Geschwindigkeit und ein Paar modifizierter M1-Garand-Gewehre, um die Oberhand zu gewinnen. Als Alucard jedoch die Cromwell-Beschwörung aktiviert und einen Teil seiner wahren Macht in Form des Schwarzen Hundes von Baskerville entfesselt, wird Luke von Angst überwältigt und versucht zu fliehen. Alucard schießt ihm mit dem Jackal beide Beine ab, und der Schwarze Hund verschlingt ihn.

Luke taucht später während der letzten Schlacht in London wieder auf. Nachdem Alucard seine volle Kraft freigesetzt und den Schwarzen Hund gegen den veränderten Walter C. Dornez eingesetzt hat, zerstört Walter den Hund, wodurch Lukes Essenz freigesetzt wird. Walter fängt Luke ein und benutzt ihn als Waffe gegen Alucard. Am Ende befreit Alucard Luke und benutzt ihn als Köder, um Walters Angriff zu vereiteln, was zu Lukes endgültiger Zerstörung führt.

In Bezug auf Beziehungen ist Lukes Bindung zu seinem Bruder Jan eine des Kontrasts, aber auch der Zusammenarbeit; sie arbeiten als Team zusammen, wobei Luke den strategischen Verstand liefert, während Jan Chaos stiftet. Seine Beziehung zu Alucard ist zentral für seinen Charakterbogen: Anfangs sieht er Alucard als die ultimative Herausforderung, aber seine Arroganz zerbricht angesichts von Alucards wahrer Macht und offenbart seine zugrunde liegende Feigheit. Seine Beziehung zum Major und anderen Millennium-Mitgliedern ist die eines Untergebenen, obwohl er den Wunsch hegt, als mehr als nur ein bloßes Werkzeug angesehen zu werden.

Lukes bemerkenswerte Fähigkeiten sind typisch für Vampire im Hellsing-Universum und umfassen übermenschliche Stärke, Geschwindigkeit und Reflexe, verbesserte Sinne, Regeneration von nicht-tödlichen Wunden und Immunität gegen Handfeuerwaffen. Er besitzt auch die Fähigkeit, Ghule zu erschaffen, indem er Menschen beißt, die keine Jungfrauen sind. Im Gegensatz zu echten Vampiren zeigt er keine hochstufigen Gestaltwandlungs- oder magischen Fähigkeiten; stattdessen verlässt er sich auf seine körperliche Stärke und sein Geschick mit Feuerwaffen und Messern. Sein markantestes Merkmal ist seine phänomenale Geschwindigkeit, die es ihm erlaubt, Kugeln auszuweichen und sich schneller zu bewegen, als die meisten Gegner verfolgen können. Trotz dieser Kräfte entbehrt er der tieferen, esoterischeren Fähigkeiten eines natürlichen Vampirs wie Alucard, und seine Abhängigkeit von Geschwindigkeit und Feuerwaffen erweist sich letztlich als unzureichend gegen einen wahrhaft uralten und mächtigen Feind.