"Night Shift Nurses" (OVA) handelt von einer Gruppe von Krankenschwestern, die in einem Krankenhaus arbeiten und sich mit verschiedenen beruflichen und persönlichen Herausforderungen auseinandersetzen. Die Handlung konzentriert sich auf die Hauptfigur Ryoichi Kurosaki, einen jungen Mann, der aufgrund eines Vorfalls in seiner Vergangenheit gezwungen ist, als Pfleger in einem Krankenhaus zu arbeiten. Dort trifft er auf drei Krankenschwestern: Reika Kitami, Mizuka Takase und Yuko Minase, die jeweils ihre eigenen Hintergründe und Motivationen haben.

Reika Kitami ist eine erfahrene und strenge Krankenschwester, die oft als Mentorin für die anderen fungiert. Mizuka Takase ist eine freundliche und fürsorgliche Kollegin, die jedoch mit persönlichen Problemen zu kämpfen hat. Yuko Minase ist die jüngste der Gruppe und zeigt sich oft unsicher, aber bemüht, ihre Aufgaben zu erfüllen. Die Interaktionen zwischen den Charakteren sind geprägt von beruflichem Druck, zwischenmenschlichen Konflikten und gelegentlichen romantischen Spannungen.

Die Handlung entwickelt sich durch eine Reihe von Episoden, in denen die Charaktere verschiedene Patienten behandeln und dabei sowohl medizinische als auch ethische Dilemmata bewältigen müssen. Dabei werden Themen wie Verantwortung, Moral und die Grenzen zwischen professionellem und privatem Verhalten thematisiert. Die OVA zeigt auch die Auswirkungen von Stress und emotionaler Belastung auf das Personal, was zu Konflikten und persönlichem Wachstum führt.

Die Erzählung bleibt eng an den Charakteren und ihren Entwicklungen orientiert, wobei die Handlung oft zwischen den beruflichen Pflichten der Krankenschwestern und ihren persönlichen Geschichten wechselt. Die OVA bietet einen Einblick in den Krankenhausalltag, der sowohl realistische Aspekte als auch dramatische Elemente beinhaltet.