Der Matsuno-Haushalt beherbergt sechs identische Zwanzigjährige Sechlinge: Osomatsu, Karamatsu, Choromatsu, Ichimatsu, Jyushimatsu und Todomatsu. Während sie in der Shōwa-Zeit noch schelmische, aber liebenswerte Grundschüler waren, haben es die Brüder in der Gegenwart nicht geschafft, ins produktive Erwachsenenleben zu starten. Alle sechs sind faule NEETs (Not in Education, Employment, or Training), die noch bei ihren zunehmend genervten Eltern leben, ihre Tage damit verbringen, Taschengeld abzuzocken, nach schnellem Geld zu schielen und sich in absurde Streitereien über Belanglosigkeiten wie die Aufteilung eines Gebäcks zu verwickeln.

Die Serie spielt in einem zeitgenössischen Japan, mit dem die Brüder zu kämpfen haben, auch wenn ihre spezifische Stadt eine etwas nostalgische, alltägliche Atmosphäre bewahrt. Jeder Bruder teilt dasselbe Gesicht, besitzt aber eine ausgeprägte Persönlichkeit, die die Komik antreibt. Osomatsu ist der egoistische, spielsüchtige Älteste, der sich selbst zum Anführer ernennt. Karamatsu ist ein wahnhafter, selbsternannter cooler Typ mit schmerzhaft dramatischen Tendenzen. Choromatsu ist der neurotische Vernunftsmensch und Stimme der Vernunft, der heimlich ein besessener Idol-Fan ist. Ichimatsu ist ein zynischer, unsozialer Einzelgänger mit einer Schwäche für Streunerkatzen. Jyushimatsu ist ein unerklärlich hyperaktiver und fröhlicher Sonderling, dessen Energie die Gesetze der Physik außer Kraft setzt. Todomatsu ist der Jüngste und oberflächlich betrachtet der Charmanteste, der seine Niedlichkeit nutzt, um andere zu manipulieren, während er heimlich mit zwei Gesichtern agiert.

Die Erzählung ist keine lineare Geschichte, sondern eine episodische Serie von schnellen Sketch-Comedies, ähnlich im Aufbau einer Variety-Show. Jede vollständige Episode ist in mehrere Segmente unterteilt, die die Brüder in eine Vielzahl von Szenarien versetzen, von alltäglichen Kämpfen wie Jobsuche und Dating bis hin zu wild absurden Abenteuern mit Mordmysterien, historischen Parodien oder den Brüdern, die als hübsche Idol-Sänger neu interpretiert werden. Die Serie ist bekannt für ihren Meta-Humor und ihre unerbittlichen Parodien auf andere Animes, die japanische Popkultur und sogar ihr eigenes Quellenmaterial. Die allererste Episode war berüchtigt dafür, so stark auf unautorisierte Parodien anderer berühmter Serien zu setzen, dass sie schließlich aus dem Streaming und von Heimvideo-Veröffentlichungen zurückgezogen wurde. Dieser respektlose, selbstreflexive Ton definiert die Serie, da sie ständig die vierte Wand durchbricht und Witze über ihren eigenen Status als Wiederbelebung eines klassischen Franchises der 1960er Jahre macht.

Die Brüder werden von einer wiederkehrenden Besetzung skurriler Charaktere aus der originalen Osomatsu-kun-Serie unterstützt, die nun ebenfalls erwachsen sind. Dazu gehören Totoko, eine eitle, fischthematische Idol-Anwärterin, die das Objekt der unerwünschten Zuneigung der Sechlinge ist; Iyami, ein vorstehzähniger, selbsternannter französischer Trickbetrüger, der verzweifelt versucht, seinen früheren Ruhm zurückzuerlangen; und Chibita, ein Oden-Wagenverkäufer, der ein lang leidender Freund und häufiges Opfer der Streiche der Brüder ist. Während die Serie sich hauptsächlich an grobem, chaotischem und manchmal schwarzem Humor über Einläufe, Arbeitslosigkeit und Geschwisterrivalität erfreut, liefert sie gelegentlich überraschend herzergreifende Momente, die die unerschütterliche, wenn auch dysfunktionale Bindung zwischen den sechs Brüdern unterstreichen.