"Black Lagoon: Roberta's Blood Trail" ist eine fünfteilige OVA, die als Fortsetzung der zweiten Staffel der Serie "Black Lagoon" fungiert. Die Handlung dreht sich um Roberta, die ehemalige Leibwächterin der Lovelace-Familie, die in einem Rachefeldzug gegen die US-Regierung und deren Geheimdienste verwickelt ist. Nachdem ihr ehemaliger Schützling, Garcia Lovelace, bei einem Terroranschlag schwer verletzt wird, glaubt Roberta fälschlicherweise, dass die USA hinter dem Angriff stecken. Sie kehrt in ihr früheres Leben als blutrünstige Guerillakämpferin zurück und stürzt sich in einen gnadenlosen Krieg.

Die Besatzung der "Black Lagoon", bestehend aus Revy, Dutch, Benny und Rock, wird von Garcia Lovelace angeheuert, um Roberta zu finden und zu stoppen, bevor sie weitere Zerstörung anrichtet. Rock, der sich zunehmend mit den moralischen Dilemmata der kriminellen Welt auseinandersetzt, versucht, Roberta auf friedlichem Wege zur Vernunft zu bringen. Gleichzeitig wird die Gruppe in die Machenschaften der CIA und anderer mächtiger Organisationen hineingezogen, die ihre eigenen Interessen verfolgen.

Die OVA vertieft die Charakterentwicklung von Rock, der zwischen seiner idealistischen Haltung und der brutalen Realität der Unterwelt hin- und hergerissen ist. Revy, die pragmatische Schützin der Gruppe, steht im Kontrast zu Rocks moralischen Bedenken und zeigt erneut ihre Fähigkeiten als erfahrene Kämpferin. Roberta selbst wird als tragische Figur dargestellt, deren unerbittlicher Rachedurst sie in den Abgrund treibt.

Die Handlung ist geprägt von intensiven Actionsequenzen, politischen Intrigen und den charakteristischen moralischen Grauzonen, die die "Black Lagoon"-Reihe auszeichnen. Die OVA bietet eine düstere und komplexe Erzählung, die die Grenzen zwischen Gut und Böse weiter verwischt und die Konsequenzen von Gewalt und Rache thematisiert.